Panoramica e preparazione dell'acetato di icatibant

Panoramica

L'icatibant acetato è un trattamento specifico per la malattia dell'angioma emangioide (HAE) sviluppato da Shire, che ha ricevuto l'approvazione della FDA il 25 agosto 2011, per la gestione degli episodi acuti di angioedema ereditario negli adulti di età pari o superiore a 18 anni. È anche il terzo farmaco approvato dalla FDA per il trattamento degli attacchi di HAE. L'icatibant acetato possiede una struttura simile a un d-decapeptide simile alla bradichinina ma contiene cinque aminoacidi non derivati ​​​​da proteine. Agisce come un potente antagonista competitivo selettivo dei recettori della bradichinina di tipo 2 (B2), alleviando il gonfiore locale, l'infiammazione e il dolore associati agli episodi di HAE inibendo gli effetti della bradichinina. L'HAE rappresenta solo una delle numerose potenziali indicazioni per le quali può essere indicato icatibant; altre potenziali applicazioni includono asma, cirrosi epatica e altri tipi di angioedema. Di conseguenza, l’icatibant acetato presenta un valore terapeutico significativo e ampie prospettive di mercato.

Formula della struttura chimica diAcetato icatibant

EessenzialeIinformazioni

Nome cinese:醋酸艾替班特

Nome inglese: Icatibant acetato

Identificativo dell'azienda：GT-F005

CAS：138614-30-9；130308-48-4

Snumero di serie：H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH   

Mformula olecolare：C59H89N19O13S

Mpeso olecolare：1304.52

Acetato icatibant Spettro MS

Itinerario sintetico

1: Preparazione della resina Fmoc-Arg(Pbf)-CTC

Aggiungere 11,1 g di resina 2-clorotrifenilmetilicloruro con una velocità di sostituzione di 0,9 mmol/g alla colonna di reazione in fase solida, seguita dall'aggiunta di resina rigonfiata con DMF per 30 minuti. Aggiungi 3,50μL di DIPEA a 12,98 g di Fmoc-Arg(Pbf)-OH e attivare per 5 minuti; quindi aggiungere la resina rigonfiata con DMF e lasciare che la miscela raggiunga l'equilibrio dopo 10 minuti. Aggiungi altri 3,50μL di DIPEA, far reagire a temperatura ambiente per 45 minuti ed infine sigillare con metanolo per 20 minuti. Evaporare la miscela di reazione, lavare tre volte con DMF, tre volte con DCM, quindi contrarre tre volte con metanolo rispettivamente per 3 minuti, 5 minuti e 8 minuti, ottenendo la resina Fmoc-Arg(Pbf)-CTC con un tasso di sostituzione misurato di 0,5 mmol/g.

2：Accoppiamento Di Fmoc-Oic-OH

Pesare 10 mmol di resina Fmoc-Arg (Pbf)-CTC e aggiungerla a un reattore in fase solida, gonfiarla in DMF per 0,5 h, quindi rimuovere la protezione Fmoc due volte utilizzando una soluzione DBLK al 20% rispettivamente per 10 minuti e 5 minuti; dopo il lavaggio coniugarlo con Fmoc-Oic-OH. Sciogliere 11,73 g di Fmoc-Oic-OH, 4,9 g di HOBt e 6,1 mL di DIC in DCM (una piccola quantità di DMF può essere aggiunta per la solubilizzazione), attivare la miscela in un bagno di acqua ghiacciata per 7 minuti, quindi trasferirla nel reattore in fase solida e reagire a temperatura ambiente per 1–2 ore Il punto finale della reazione è determinato mediante il metodo dell'indantrone. Al termine, aspirare la miscela di reazione, lavare con DMF, rimuovere la protezione Fmoc due volte utilizzando una soluzione DBLK al 20% rispettivamente per 10 minuti e 5 minuti, lavare nuovamente e preparare l'accoppiamento con l'amminoacido successivo.

3：Accoppiamento Di Fmoc-D-Cit-OH

Sciogliere 11,91 g di Fmoc-D-Cit-OH, 5,00 g di HOAt e 11,4 g di HATU in DCM (con una piccola quantità di DMF aggiunta per la solubilizzazione). Aggiungere 3,87 g di DIPEA a bagnomaria e attivare per 7 minuti; trasferire quindi la miscela in un reattore in fase solida e far reagire a temperatura ambiente per 1–2 ore. Il completamento della reazione è determinato mediante il metodo dell'indiolo. Dopo la reazione, rimuovere la miscela di reazione, lavare con DMF ed eliminare la protezione Fmoc utilizzando una soluzione DBLK al 20%. Dopo il lavaggio, prepararsi per l'accoppiamento con l'amminoacido successivo.

4：Accoppiamento Di Fmoc-Ser(tBu)-OH

Sciogliere 11,49 g di Fmoc-Ser(tBu)-OH, 5,00 g di HOAt e 6,1 mL di DIC in DCM (con una piccola quantità di DMF aggiunta per la solubilizzazione). Dopo l'attivazione sotto bagno di acqua ghiacciata per 7 minuti, trasferire la miscela in un reattore in fase solida e reagire a temperatura ambiente per 1–2 ore; il completamento della reazione è determinato mediante il metodo dell'indiolo. Al termine, rimuovere la miscela di reazione, lavare con DMF, quindi eliminare la protezione Fmoc utilizzando una soluzione di DBLK al 20%, seguita da lavaggio prima di procedere all'accoppiamento con l'amminoacido successivo.

5：Accoppiamento Di Fmoc-Questo-OH

Sciogliere 11,79 g di Fmoc-Thi-OH, 5,00 g di HOBt e 11,37 g di HBTU in DCM (con una piccola quantità di DMF aggiunta per la solubilizzazione). Aggiungere 3,87 g di DIPEA a bagnomaria e attivare per 7 minuti; quindi trasferire la miscela in un reattore in fase solida e lasciare reagire a temperatura ambiente per 1–2 ore. Il completamento della reazione è determinato mediante il metodo dell'indiolo. Dopo la reazione, rimuovere la miscela di reazione, lavare con DMF ed eliminare la protezione Fmoc utilizzando una soluzione DBLK al 20%. Dopo il lavaggio, prepararsi per l'accoppiamento con l'amminoacido successivo.

6：Accoppiamento Di Fmoc-Gly-OH

Sciogliere 8,91 g di Fmoc-Gly-OH, 5,00 g di HOBt e 9,63 g di TBTU in DCM (con una piccola quantità di DMF aggiunta per la solubilizzazione). Aggiungere 3,63 g di TMP sotto bagno di acqua ghiacciata e attivare per 7 minuti; quindi trasferire la miscela in un reattore in fase solida e lasciare reagire a temperatura ambiente per 1–2 ore. Il completamento della reazione è determinato mediante il metodo dell'indanone. Dopo la reazione, rimuovere la miscela di reazione, lavare con DMF ed eliminare la protezione Fmoc utilizzando una soluzione DBLK al 20%. Dopo il lavaggio, prepararsi per l'accoppiamento con l'amminoacido successivo.

7：Accoppiamento Di  Fmoc-Ip(tBu)-OH

Sciogliere 12,27 g di Fmoc-Ip(tBu)–OH, 5,00 g di HOAt e 9,66 g di TATU in DCM (con una piccola quantità di DMF aggiunta per la solubilizzazione). Aggiungere 3,63 g di TMP sotto bagno di acqua ghiacciata e attivare per 7 minuti; trasferire quindi la miscela in un reattore in fase solida e far reagire a temperatura ambiente per 1–2 ore. Il punto finale della reazione è determinato mediante il metodo dell'indiolo. Al termine, rimuovere la miscela di reazione, lavare con DMF ed eliminare la protezione Fmoc utilizzando una soluzione DBLK al 20%. Dopo il lavaggio, prepararsi per l'accoppiamento con l'amminoacido successivo.

8：Accoppiamento Di Fmoc-Pro-OH

Sciogliere 10,11 g di Fmoc-Pro-OH, 5,00 g di HOAt e 11,4 g di HATU in DCM (con una piccola quantità di DMF aggiunta per la solubilizzazione). Aggiungere 3,87 g di DIPEA a bagnomaria e attivare per 7 minuti; trasferire quindi la miscela in un reattore in fase solida e far reagire a temperatura ambiente per 1–2 ore. Il punto finale della reazione è determinato mediante il metodo dell'indiolo. Al termine rimuovere la miscela di reazione, lavare con DMF ed eliminare la protezione Fmoc utilizzando DBLK al 20%. Dopo il lavaggio, prepararsi per l'accoppiamento con l'amminoacido successivo.

9：Accoppiamento Di Fmoc-Arg(Pbf)-OH

Sciogliere 19,44 g di Fmoc-Arg(Pbf)-OH, 5,00 g di HOAt e 11,4 g di HATU in DCM (con una piccola quantità di DMF aggiunta per la solubilizzazione). Aggiungere 3,87 g di DIPEA a bagnomaria e attivare per 7 minuti; trasferire quindi la miscela in un reattore in fase solida e far reagire a temperatura ambiente per 1–2 ore. Il completamento della reazione è determinato mediante il metodo dell'indiolo. Dopo la reazione, rimuovere la miscela di reazione, lavare con DMF ed eliminare la protezione Fmoc utilizzando una soluzione DBLK al 20%. Dopo il lavaggio, prepararsi per l'accoppiamento con l'amminoacido successivo.

10：Accoppiamento Di Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH

Sciogliere 19,44 g di Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, 5,00 g di HOAt e 11,4 g di HATU in DCM (con una piccola quantità di DMF aggiunta per la solubilizzazione). Aggiungere 3,87 g di DIPEA a bagnomaria e attivare per 7 minuti; trasferire quindi la miscela in un reattore in fase solida e far reagire a temperatura ambiente per 1–2 ore. Il punto finale della reazione è determinato mediante il metodo dell'indiolone. Al termine, rimuovere la miscela di reazione, lavare con DMF, quindi utilizzare DBLK al 20% per rimuovere la protezione Fmoc. Lavare tre volte con DMF, tre volte con DCM e tre volte con metanolo per la contrazione (rispettivamente per 3 minuti, 5 minuti e 8 minuti), seguito da essiccazione sotto vuoto per ottenere la resina di acetato peptidico etibant.

Cromatogramma HPLC di Icatibant acetato

11：Pirolisi della resina dell'acetato di Icatibant

Preparare 200 mL di reagente di lisi contenente 190 mL di acido trifluoroacetico, 6 mL di triisopropilsilano e 4 mL di acqua e preraffreddarlo in frigorifero per 30 minuti. Aggiungere 20,0 g di resina di acetato peptidico etibant in un pallone a fondo tondo da 500 mL, quindi aggiungere il reagente di lisi da 200 mL preparato alla resina mescolando sotto un bagno di ghiaccio e sotto flusso di azoto. Dopo 30 minuti di reazione, rimuovere il bagno di ghiaccio e continuare la reazione a temperatura ambiente per 2 ore. Filtrare la resina e raccogliere il filtrato. Lavare la resina con una piccola quantità di acido trifluoroacetico, filtrare e unire i filtrati. Aggiungere gradualmente il filtrato a 20 L di etere ghiacciato; si forma un precipitato bianco. Centrifugare a 3000 giri al minuto per raccogliere il precipitato, lavare cinque volte con etere ghiacciato ed essiccare a pressione ridotta per ottenere 10,3 g di peptide grezzo con purezza HPLC > 90%.