Metodo di preparazione della Cagrilintide

Tecnologia di fondo

Cagrilintide è un nuovo analogo acilato dell’amilina a lunga durata d’azione. Come agonista non selettivo del recettore dell'amilina (AMYR) e del recettore accoppiato alla proteina della calcitonina G (CTR), è un polipeptide ciclico composto da 38 aminoacidi. La sua sequenza contiene 38 aminoacidi e una coppia di legami disolfuro. Cagrilintide può ridurre significativamente il peso corporeo e l’assunzione di cibo e ha un potenziale nella ricerca sull’obesità. L’amilina è un altro ormone correlato alla fame e alla sazietà al di fuori della via di segnalazione del GLP-1.

 

Cagrilintide può ridurre l’apporto energetico, regolare le scelte e le preferenze alimentari, esercitare un effetto di regolazione del glucosio essendo co-secreto con l’insulina, inibire il rilascio di glucagone postprandiale e ritardare lo svuotamento gastrico. Presenta evidenti vantaggi nel trattamento del diabete, dell'obesità, della sindrome metabolica, delle malattie cardiovascolari e di altri aspetti e ha un'ampia domanda e prospettive di applicazione.

Formula strutturale chimica della Cagrilintide

 

 

Informazioni di base

---

Nome cinese：卡格列肽

IngleseName：Cagrilintide

Numero dell'azienda：GT-F064

CAS：1415456-99-3

Ssequenza：γ-Glu-Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Glu-Phe-Leu-Arg-His-Ser-Ser-Asn-As n-Phe-Gly-Pro-Ile-Leu-Pro-Pro-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Pro-NH2 (ponte disolfuro: cis4-cys9)

MolecolareFfformula：C₁₉₄H₃₁₂N₅₄O₅₉S₂

MolecolarePeso：4409.01

 

Materie prime utilizzate perCagrilintide

 

Itinerario sintetico

---

Secondo i brevetti pertinenti per cagrilintide, è possibile ottenere il metodo di sintesi di cagrilintide. Gli amminoacidi nelle posizioni 7-8 della sequenza cagrilintide sono selezionati come il dipeptide pseudoprolina Fmoc-Ala-Thr(pro-me-me)-OH, gli amminoacidi nelle posizioni 10-11 della sequenza come il dipeptide pseudoprolina Fmoc-Ala-Thr(pro-me-me)-OH e gli amminoacidi nelle posizioni 21-22 della sequenza come dipeptide pseudoprolina Fmoc-Ser-Ser(pro-me-me)-OH; le reazioni di accoppiamento vengono eseguite nelle restanti posizioni secondo la sequenza aminoacidica; la resina peptidica viene scissa per ottenere cagrilintide lineare; la cagrilintide grezza viene quindi ottenuta tramite ciclizzazione in fase liquida, mentre la cagrilintide raffinata viene ottenuta tramite preparazione alla purificazione, trasferimento del sale, concentrazione e liofilizzazione. Questo metodo utilizza tre dipeptidi pseudoprolina per l'accoppiamento. Sebbene risolva il problema della maggiore difficoltà di accoppiamento causata dalla policondensazione della resina, aumenta i costi di produzione e il peptide raffinato ottenuto con questo processo ha una purezza relativamente bassa, che non riesce a soddisfare i requisiti di qualità per gli ingredienti farmaceutici attivi.

Diagramma della preparazione della cagrilintide

 

(1)Preparazione diCagrilintideResina peptidica

Prendere 1,5 mmol del primo amminoacido protetto e 1,5 mmol di HOBT, sciogliere con una quantità adeguata di DMF e raffreddare a 0~15°C; prendere altre 1,5 mmol di DIC, aggiungerle lentamente alla soluzione DMF dell'amminoacido protetto sotto agitazione e agitare la reazione per 10 minuti a 0~15°C per ottenere una soluzione di amminoacido protetto attivato, che viene messa da parte.

 

Prelevare 0,5 mmol di resina amminica (grado di sostituzione 0,42 mmol/g), rigonfiarla con soluzione DMF per 60 minuti, deproteggerla con soluzione Pip/DMF al 20% per 30 min, lavare e filtrare per ottenere la resina da far reagire.

 

Aggiungere la soluzione del primo amminoacido protetto attivato alla resina da far reagire, effettuare la reazione di accoppiamento a 25~35℃ per 120~300 minuti, filtrare e lavare per ottenere la resina contenente 1 amminoacido protetto: Fmoc-Pro-Resin

 

Utilizzando lo stesso metodo di cui sopra, accedere in sequenza ai corrispondenti amminoacidi o frammenti protetti dal 2° al 38° menzionati sopra:Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Val-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Ile-OH，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Phe-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Ala-OH·H2O，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Gln(Trt)-OH，Fmoc-Ala-Thr(psi(Me,Me)pro)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Ala-Thr(psi(Me,Me)pro)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Glu-OtBu，Mono-terz-butil eicosanedioato, che produce 4,98 g di resina peptidica carmegliptin

 

(2)Preparazione del grezzoCagrilintide peptide lineare

Prendere 4,49 g di resina peptidica carfilzomib, aggiungere la soluzione mista di TFA, il rapporto della soluzione mista è TFA:EDT/Tis/fenolo/H₂O = 87,5:2,5:5:2,5:2,5 e il dosaggio è 8 ml per grammo di resina; agitare la reazione a 20~30°C per 3 ore, filtrare la miscela di reazione con un imbuto con nucleo di sabbia, raccogliere il filtrato, lavare la resina con una piccola quantità di TFA 3 volte, unire i filtrati, aggiungere MTBE per la precipitazione, lavare il precipitato con MTBE 3 volte e pompare a secco per ottenere una polvere biancastra, ovvero 2,08 g di peptide carfilzomib lineare grezzo.

 

(3)Preparazione della soluzione grezza del peptide ciclico Cagrilintide

Prendi 0,50 g di grezzo lineareCagrilintide, preparare una soluzione di peptide lineare grezzo a una concentrazione di 5,0 mg/ml, aggiungere goccia a goccia 5 ml di soluzione di DMSO sotto agitazione e reagire a 20~30℃ per 20 ore per ottenere una soluzione di peptide ciclico grezzo di cagrilintide.

 

(4)Preparazione del raffinatoCpeptide agrilintide

Prendi il grezzoCsoluzione di peptide ciclico arraglitide e filtrarla con una membrana filtrante microporosa mista da 0,45 μm；

 

Purificare e preparare utilizzando la cromatografia liquida ad alta prestazione e raccogliere ilCfrazioni di arragliptin；

 

Per lo scambio del tampone è stata utilizzata la cromatografia liquida ad alte prestazioni. Il picco principale dopo lo scambio del tampone è stato raccolto e la sua purezza è stata rilevata mediante cromatografia liquida analitica. Le principali soluzioni di picco dopo lo scambio del tampone sono state combinate, concentrate sotto pressione ridotta per ottenere una soluzione acquosa di acido acetico di carbotide, che è stata liofilizzata per ottenere 152,18 mg di carbotide raffinato con una purezza del 99,58%, un'impurezza singola massima di 0,09%, una resa totale del 31,87% e un peso molecolare di 4409,0

 

HPLC diagramma

 

Diagramma MS

 

Gli esempi di cui sopra mostrano che, rispetto al processo di sintesi di accoppiamento passo-passo, il prodotto ottenuto con il metodo fornito dalla presente invenzione ha una purezza superiore al 99,0% e ogni singola impurità è inferiore allo 0,1%, il che migliora la qualità del prodotto e la resa totale. Il processo è semplice e facile da controllare, ha un alto grado di industrializzazione e ha un ampio valore pratico e prospettive applicative.

Contattaci

---

Cerchi Cagrilintide per il tuo programma? Cosperpharm è il tuo partner di fiducia per prodotti intermedi e standard di impurità. Contattaci oggi: siamo pronti a supportare il tuo progetto dalla ricerca e sviluppo alla produzione commerciale.

 

Telefono: +86-18986204913

 

Tel: +86-027-83338163

 

E-Mail: info@cosperpharma.com